Mesa # 4.
4L2m.
[Medios de cultivo]
(AGAR MIO)..
Practica 2….
*Dr. Víctor Manuel Alfaro López.
26-04-10.
Practica #2.
[Medios de Cultivo]
.
.
.
V
Agar Mio.
(Medio movilidad-indol-ornitina)
[Objetivo]*
Realizar Medio de Cultivo (Agar MIO).
Para poder realizar el medio mio es necesario conocer como se integra, las indicaciones y como realizaremos el medio además cuanto tiempo se tiene que centrifugar etc.
Consta de:
Peptona de Gelatina 10.0 L-Ornitina 5.0
Peptona de Caseína 10.0 Dextrosa 1.0
Extracto de Levadura 3.0 Púrpura de Bromocresol 2.0
Agar Bacteriológico 2.0
pH 6.5 ± 0.2
Método:
Suspender 31 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa
disolución y hervir durante un minuto. Dispensar en tubos de vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a
121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Dejar enfriar en posición vertical.
[INTRODUCCION]*
El Medio MIO es utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a su movilidad, capacidad para
descarboxilar la lisina y la producción de indol. Este medio también es conocido como Medio para
Movilidad Indol y Ornitina.
En este medio las peptonas proporcionan la fuente de carbono y nitrógeno. El extracto de levadura provee
las vitaminas y cofactores requeridos para el desarrollo. La dextrosa proporciona la fuente de energía. El
agar es adicionado para demostrar la movilidad. El púrpura de bromocresol actúa como indicador de
cambios de pH facilitando la detección de la descarboxilación de la lisina.
[MATERIALES]*
*Gasas.
*Algodón.
*Papel secante.
*Espatula.
*(18) Tubos de ensayo.
*Vidrio de reloj.
*balanza granataria.
*Agitador de cristal.
*Matraz Erlenmeyer 500 ml.
*Probeta.
*Vaso de precipitado.
*Tape testigo.
*tape.
*Papel esterilizado.
*Guante asbesto.
*Gas L.P.
*(2) Mecheros de Bunsen.
*Autoclave.
*Maquina para esterilizar Tubos.
*agua destilada.
*Agar MIO.
[TECNICA DE ESTERILIZACION]*
121 grados centígrados (15 lbs. de presión), durante 15 minutos.
[PROCEDIMIENTO]*
1. Equipo de bioseguridad (bata, guantes, cubre bocas, gorro).
2. Colocar el campo de esterilización.
3. Colocar materiales que vallamos a utilizar.
4. Pesar el vidrio de reloj (14.6 gr) y después el medio de cultivo (11.16 gr.) el medio de cultivo en este caso agar MIO lo pasamos al matraz erlenmeyer con ayuda de un embudo para evitar que se tire el polvo y mezclamos con 360 ml de agua destilada que se encuentra en el matraz erlenmeyer.
5. Mezclamos con el agitador de cristal hasta que diluya y no se encuentren grumos.
6. Calentamos a punto de ebullición con el mechero de bunsen.
7. Dejamos reposar 15 minutos.
8. Colocar y taponear con torundas de algodón y gasa, etiquetamos (mesa, grupo, fecha, medio) y colocamos un pedazo de tape testigo.
9. Colocar en autoclave a 121 grados centígrados (15 lbs. De presión durante 15 min. )
10. Dejamos enfriar un poco.
11. Bacear a tubos de ensayo que anteriormente esterilizamos en la maquina.
12. Bacear 10 ml de medio a cada tubo, colocamos algodón en la parte superior del tubo para evitar que se tire el liquido, etiquetamos los tubos y colocamos en un vaso de precipitado.
P.D.[ al etiquetar debe de tener nombre, grupo, fecha, mesa, medio]
[CONCLUSION]*
Aprendimos que a pesar que cometemos errores hablando y leyendo aprendemos y que no debemos hacer las cosas atrabancándonos o aferrando, tenemos que tener cuidado y no adelantarnos a la forma que queremos, mas vale tardar un poco más que hacer las cosas mal.
Y también aprendimos que Edered y Clark así como Oberhofer y Hajkowsky desarrollaron el Medio MIO para poder observar las
reacciones de movilidad, producción de indol y descarboxilación de la lisina simultáneamente. Estas
reacciones son determinantes para la identificación de enterobacterias.
martes, 27 de abril de 2010
miércoles, 21 de abril de 2010
coprocultivo
Análisis Coprocultivo
Es un estudio ordenado por el médico cuando se sospecha la presencia de parásitos, larvas, o huevos de diferentes familias de helmintos, amebas, tenias y protozoos.
Síntomas
El médico ordena este estudio cuando el paciente presenta:
• Diarrea
• Gases
• Dolores o cólicos, etc.
Cómo nos podemos contaminar
• Bebiendo agua contaminada
• Verduras frescas mal lavadas
• Consumir alimentos contaminados en lugares de poca higiene
• Comer con las manos sucias, etc.
Cuando los parásitos se alojan en el aparato digestivo, una proporción de ellos, o las larvas, o los huevos... son eliminados con las heces. Como la cantidad que se elimina en cada defecación puede ser variable, y si hay poco número de parásitos en el intestino, lógicamente también serán escasos en las muestras que se tomen, no siempre que una muestra sale negativa se puede descartar la infección. Por eso, normalmente se toman tres muestras de heces, en tres días distintos. De esta forma se confirma la infección.
Para que estés bien y puedan realizarte tus estudios
• Niños: Se recoge una muestra de una sola deposición con un hisopo estéril y se introduce en un frasco de las mismas condiciones. Una vez recogida la muestra se mantiene a temperatura ambiente hasta el momento de entregarla al laboratorio. En el laboratorio pueden realizar este procedimiento en bebés o niños muy pequeños.
• Adultos: Se recoge la muestra de una sola deposición en un frasco estéril. Una vez recogida la muestra, se mantiene a temperatura ambiente hasta el momento de entregarla. Una cantidad aproximada de 2 cucharadas es suficiente para realizar el estudio.
• Coméntale a tu médico de todo tipo de medicamento que estés tomando en ese momento.
• El médico puede ordenar muestra fecal de tres días.
http://www.paraqueestesbien.com/analisis/analisis_49.htm
El coprocultivo es una prueba diagnostica que, por medio del cultivo de las heces, permite conocer la causa del origen de las gastroenteritis y aporta información acerca del tratamiento mas idóneo al caso.
Material necesario para la toma de la muestra:
Recipiente de boca ancha para recoger las heces tipo orinal, bacinilla o cuña.
Procesamiento de la muestra:
Heces liquidas: No necesitan procesamiento.
Heces duras: Hay que licuarlas.
Tomar 5 ml del suero fisiológico y adicionar 5 ml a las heces.
Mover con un depresor hasta que las heces queden lo suficientemente liquidas como para tomar un inoculo.
Procedimiento:
Tincion de gram de muestras.
Siembra sobre diferentes medios de cultivo.
Identificacion.
Una vez que sabemos que tipo de bacterias tenemos, se procesara a la identificación de cada una para su diagnostico. Para ello, se realizan distintos tipos de pruebas que nos llevaran a la bacteria en cuestión. Bacilos gram -: lo primero que hicimos fue la prueba de la OXIDASA. Esta constituye en depositar 1 o 2 gotas de ractivo de la oxidasa sobre un papel de filtro y restregar sobre ellas un inoculo de la colonia. Si aparece una coloración morada se considera como positiva, mientras que si no se produce cambio la prueba es negativa. Si todas son negativas se trata de pseudomona aeruginosa. Bacilos gram . y lac +: se somete posteriormente a la prueba de catalasa para ello, se introduce con el asa de siembra un inoculo de la colonia en un tubo con agua oxigenada. Si aparecen burbujas, se considera positiva.
Bacilos gram – y lac +. Ralizamos la prueba de indol, se introduce un inoculo de la bacteria a estudiar en un tubo que contiene agua de peptona y se incuba a 37 grados centrigados durante 24 hrs. Pasado ese tiempo se le añaden unas gotas del reactivo de Kovacs. Si es positiva aparecera un halo de color rojo. colonia 2 b: la prueba de la movilidad consiste en sembrar un agar de movilidad en picadura. antibiogramas : para probar la resistencia o sensibilidad de la bacteria frente diferentes antibióticos para el tratamiento adecuado. Usamos un medio mueller hinton previamente dispensado en una placa. Mojar un escobillon esteril en una suspensión al 0.5 mc farland y restregarlo en la placa, dejando secar 4 o 5 minutos. Los discos de antibiótico se colocan con pinzas Tincion de esporas:
Dejar enfriar y lavar con agua.
Adicionar safranina y dejar actuar aproximadamente 1 min.
Depsues de esto, se hace la observación al microscopio óptico:
Las estructuras bacterianan aparecerán rosas.
Las esporas aparecerán verdes.
Nitratos se trata de un clado. La bacteria se siembra en 3 tubos de este y lo incubamos. Pasadas 24 hrs., se revela con 2 reactivos, el a y b de los que le añaden unas gotas a uno de los tubos. Si aprece rojo es + si no hay coloración se añade una espátula de cinc en polvo y si se pone rojo -.
Citrato es un slant sembrado por estrias que se considea positivo cuando cambia el medio a color azul y negativo si cambia a verde.
Es un estudio ordenado por el médico cuando se sospecha la presencia de parásitos, larvas, o huevos de diferentes familias de helmintos, amebas, tenias y protozoos.
Síntomas
El médico ordena este estudio cuando el paciente presenta:
• Diarrea
• Gases
• Dolores o cólicos, etc.
Cómo nos podemos contaminar
• Bebiendo agua contaminada
• Verduras frescas mal lavadas
• Consumir alimentos contaminados en lugares de poca higiene
• Comer con las manos sucias, etc.
Cuando los parásitos se alojan en el aparato digestivo, una proporción de ellos, o las larvas, o los huevos... son eliminados con las heces. Como la cantidad que se elimina en cada defecación puede ser variable, y si hay poco número de parásitos en el intestino, lógicamente también serán escasos en las muestras que se tomen, no siempre que una muestra sale negativa se puede descartar la infección. Por eso, normalmente se toman tres muestras de heces, en tres días distintos. De esta forma se confirma la infección.
Para que estés bien y puedan realizarte tus estudios
• Niños: Se recoge una muestra de una sola deposición con un hisopo estéril y se introduce en un frasco de las mismas condiciones. Una vez recogida la muestra se mantiene a temperatura ambiente hasta el momento de entregarla al laboratorio. En el laboratorio pueden realizar este procedimiento en bebés o niños muy pequeños.
• Adultos: Se recoge la muestra de una sola deposición en un frasco estéril. Una vez recogida la muestra, se mantiene a temperatura ambiente hasta el momento de entregarla. Una cantidad aproximada de 2 cucharadas es suficiente para realizar el estudio.
• Coméntale a tu médico de todo tipo de medicamento que estés tomando en ese momento.
• El médico puede ordenar muestra fecal de tres días.
http://www.paraqueestesbien.com/analisis/analisis_49.htm
El coprocultivo es una prueba diagnostica que, por medio del cultivo de las heces, permite conocer la causa del origen de las gastroenteritis y aporta información acerca del tratamiento mas idóneo al caso.
Material necesario para la toma de la muestra:
Recipiente de boca ancha para recoger las heces tipo orinal, bacinilla o cuña.
Procesamiento de la muestra:
Heces liquidas: No necesitan procesamiento.
Heces duras: Hay que licuarlas.
Tomar 5 ml del suero fisiológico y adicionar 5 ml a las heces.
Mover con un depresor hasta que las heces queden lo suficientemente liquidas como para tomar un inoculo.
Procedimiento:
Tincion de gram de muestras.
Siembra sobre diferentes medios de cultivo.
Identificacion.
Una vez que sabemos que tipo de bacterias tenemos, se procesara a la identificación de cada una para su diagnostico. Para ello, se realizan distintos tipos de pruebas que nos llevaran a la bacteria en cuestión. Bacilos gram -: lo primero que hicimos fue la prueba de la OXIDASA. Esta constituye en depositar 1 o 2 gotas de ractivo de la oxidasa sobre un papel de filtro y restregar sobre ellas un inoculo de la colonia. Si aparece una coloración morada se considera como positiva, mientras que si no se produce cambio la prueba es negativa. Si todas son negativas se trata de pseudomona aeruginosa. Bacilos gram . y lac +: se somete posteriormente a la prueba de catalasa para ello, se introduce con el asa de siembra un inoculo de la colonia en un tubo con agua oxigenada. Si aparecen burbujas, se considera positiva.
Bacilos gram – y lac +. Ralizamos la prueba de indol, se introduce un inoculo de la bacteria a estudiar en un tubo que contiene agua de peptona y se incuba a 37 grados centrigados durante 24 hrs. Pasado ese tiempo se le añaden unas gotas del reactivo de Kovacs. Si es positiva aparecera un halo de color rojo. colonia 2 b: la prueba de la movilidad consiste en sembrar un agar de movilidad en picadura. antibiogramas : para probar la resistencia o sensibilidad de la bacteria frente diferentes antibióticos para el tratamiento adecuado. Usamos un medio mueller hinton previamente dispensado en una placa. Mojar un escobillon esteril en una suspensión al 0.5 mc farland y restregarlo en la placa, dejando secar 4 o 5 minutos. Los discos de antibiótico se colocan con pinzas Tincion de esporas:
Dejar enfriar y lavar con agua.
Adicionar safranina y dejar actuar aproximadamente 1 min.
Depsues de esto, se hace la observación al microscopio óptico:
Las estructuras bacterianan aparecerán rosas.
Las esporas aparecerán verdes.
Nitratos se trata de un clado. La bacteria se siembra en 3 tubos de este y lo incubamos. Pasadas 24 hrs., se revela con 2 reactivos, el a y b de los que le añaden unas gotas a uno de los tubos. Si aprece rojo es + si no hay coloración se añade una espátula de cinc en polvo y si se pone rojo -.
Citrato es un slant sembrado por estrias que se considea positivo cuando cambia el medio a color azul y negativo si cambia a verde.
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