miércoles, 31 de marzo de 2010












Medios de cultivo ANTES DE PRUEBAS BIOQUIMICAS.
*Fermentan con producción de ácido y gas, la lactosa y un gran número de hidrocarbonatos.
* Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
*Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una via metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
*Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de multiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
Procedimiento experimental
Inoculación de pruebas bioquímicas: apartir de un cultivo fresco de la cepa bacteriana (18 – 24 hrs.) se toma una muestra de una colonia con un asa en punta y se procede a inocular diversos medios de cultivo sólido de acuerdo al protocolo específico establecido para cada ensayo experimental.
En el caso de las pruebas bioquímicas de tipo líquido (caldo rojo de metilo y caldo lactosa rojo de fenol), estas se inoculan a partir de un cultivo bacteriano en caldo.
Incubación de las muestras: todos los tubos de ensayo inoculados seincuban a 37ºC por tiempos variables, dependiendo de la especificación de cada uno de los test bioquímicos utilizados.
Ejemplo de inoculación en medio sólido:
Agar citrato
La utilización de citrato como única fuente de carbono es una prueba útil en la identificación de enterobacterias. La utilización de citrato como única fuente de carbono se detecta en un medio de cultivo con citrato como única fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinización del medio. Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH 7,6.
Procedimiento:
Se inocula el agar inclinado en una sola estría en el pico. Utilizar un cultivo de 24 horas en un medio sólido y cuidando no arrastrar medio de cultivo, ya que se pueden producir  falsos positivos por crecimiento a partir del medio de cultivo del inóculo. Incubar a 35°C durante 4 días. El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estría, acompañado o no de un viraje del indicador al azul.
Resultados:
(+)Klebsiella spp.
( - ) Escherichia Coli.

Indol
El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica importante para la identificación de muchas especies de microorganismos. La prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo de los reactivos de Kovacs y Ehrlich. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.
Procedimiento:
Inocular el caldo triptofano con el organismo en estudio e incubar a 35°C durante 18 a 24 horas. Al finalizar este período, añadir 5 gotas de reactivo de Kovacs por la pared interior del tubo. El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo, segundos después de añadir el reactivo indica la presencia de indol y una prueba positiva.
Resultados:
(+) Escherichia coli
( - ) Klebsiella pneumoniae
Rojo Metilo
Una de las características taxonómicas que se utilizan para identificar los diferentes géneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporción de productos de fermentación que se originan por la fermentación de la glucosa. Se conocen 2 tipos generales: La fermentación ácido-mixta y la fermentación del 2,3 butanodiol. En la fermentación ácido mixta se forman fundamentalmente láctico, acético y succínico, además de etanol, H2 y CO2. En la vía del butanodiol se forman cantidades menores de ácido (acetato y succinato) y los principales productos son el butanodiol, etanol, H2 y CO2.  El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la producción de ácidos por la vía de fermentación ácido mixta.
Procedimiento:
Inocular el caldo Rojo Metilo con un cultivo puro de no más de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35°C durante 48 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubación agregar unas gotas del reactivo de rojo de metilo. La prueba es positiva si se desarrolla de un color rojo estable. Esto indica que la producción de ácido es suficiente para producir el viraje del indicador y el microorganismo fermentó la glucosa por la vía de ácido mixta. Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo.
Resultados:
(+) Escherichia coli ( - ) Enterobacter aerogenes

Vogues Proskauer
En la prueba de Voges-Proskauer se determina la vía de fermentación del butanodiol descripta en la prueba de rojo de metilo. El acetil-metil-carbinol (o acetoína) es un producto intermediario en la producción de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la acetoína es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.
Procedimiento:
Inocular el caldo RMVP con un cultivo puro de no más de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35°C durante 24 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubación transferir 1 ml del caldo RM/VP a un tubo limpio y agregar 0,6 ml de alfa-naftol al 5% y 0,2 ml de KOH al 40%. Agitar el tubo cuidadosamente para exponer el medio al oxígeno atmosférico y dejarlo reposar durante 10 a 15 minutos. El desarrollo de un color rojo-fucsia  luego de 15 minutos indica la presencia de diacetilo, producto de oxidación de la acetoína y por lo tanto una prueba VP positiva.
Resultados:
(+) Enterobacter aerogenes
(-)Escherichia coli

Microorganismos utilizados en las pruebas bioquímicas
PSEUDOMONA SPP.
Familia: ENTEROBACTER
Tinción: GRAM –
Forma: BACILOS CORTOS, CURVADOS O RECTOS
Movilidad: POSEE FLAGELOS POLARES

SALMONELLA
Familia: ENTEROBACTER
Tinción: GRAM –
Forma: BACILOS CORTOS
Movilidad: FLAGELOS PERÍTRICOS

SHIGUELLA SPP.
Familia: ENTEROBACTER
Tinción: GRAM –
Forma: BASTONCILLOS

ESCHERICHIA COLI
Familia: ENTEROBACTER
Tinción: GRAM –
Forma: BACILOS CORTOS NO ESPORULADOS .
Movilidad: FLAGELOS PERÍTRICOS

STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Familia: MICROCACEAE
Tinción: GRAM +.
Forma: COCACEA

PRUEBAS BIOQUIMICAS CONVENCIONALES
Agar Triple Hierro-Triple Azúcar (Agar TSI o Triple Sugar Iron).
Este medio se emplea para detectar la fermentación de lactosa, sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas y, también para detectar la producción de ácido sulfhídrico.
Agar Hierro Lisina (Agar LIA o Lisyne Iron Agar).
Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo.
Medio Movilidad-Indol-Ornitina (Medio MIO o Motility Indole Ornithine Médium).
Se emplea para determinar la movilidad, presencia de una actividad de la enzima ornitina decarboxilasa y, la producción de indol.
Agar Citrato de Simmons (Simmons Citrate Agar).
Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio
Agar SIM (Sulfide Indole Motility Medium).
Medio que permite poner en evidencia la producción de indol, ácido sulfhídrico y movilidad de las bacterias.
Catalasa.
Esta prueba sirve para comprobar la presencia de la enzima catalasa en preparaciones de microorganismos.
Caldo RM – VP (Methyl Red and Voges Proskauer Test).
Con estas dos pruebas se estudia qué tipo de fermentación (butilenglicólica o ácido mixta) realiza el microorganismo en estudio.
La prueba de Voges-Proskauer sirve para comprobar la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, el acetilmetilcarbinol (acetoína) a partir de la fermentación (butilenglicólica) de la glucosa. La prueba del rojo de metilo sirve para comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación (ácido mixta) de la glucosa.
Caldo Lactosa Rojo de Fenol (CLRF o Phenol Red Lactose Broth).
Este medio permite evidenciar la presencia de bacterias fermentadoras del azúcar lactosa.

Preparación de medios de cultivo. Bacteriología II.
O B J E T I V O
El objetivo de la presente práctica es aprender a preparar correctamente los principales de medios de cultivo que se utilizan en el laboratorio de Bacteriología, como instrumentes de suma importancia en la dignosticación de bacterias patógenas dentro de los individuos. Asimismo, conocer los diferentes tipos de cultivo, su clacificación y su importancia en la diagnosticación.
I N T R O D U C C I Ó N
Un método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las células que se multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.
Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es imposible diferenciarlas sólo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus características bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo especiales. Así, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si está presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azúcares especiales que sólo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se añaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos ácidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentación, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: así, algunas bacterias con enzimas hemolíticas (capaces de romper los glóbulos rojos) producen hemólisis y cambios apreciables macroscópicamente en las placas de agar-sangre. Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiología de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que son sensibles esas bacterias.

Los requerimientos necesarios para un cultivo de bacterias son:
Medio de carbono.
Presencia o ausencia de oxigeno.
Atmósfera adecuada.
Agar-agar. Para un cultivo adecuado de bacterias y microorganismos, se utiliza el agar, un gel coloidal formado por hidratos de carbono, de extendido uso comercial, y que proviene de las paredes celulares de varias especies de algas rojas, en concreto de miembros orientales del género Gelidium. Se utiliza como agente solidificante en la preparación de dulces, cremas y lociones, así como en las conservas de pescado y carne; para texturizar y emulsionar los helados y postres congelados; para clarificar, durante el proceso de fabricación del vino y la elaboración de la cerveza; y también para dar apresto (almidonar) las telas. Además, es un excelente medio de cultivo de bacterias, ya que no se disuelve por el efecto de las sales, ni se consume por la acción de la mayoría de los microorganismos.
El agar se extrae de las algas marinas haciéndolas hervir. Posteriormente, el producto resultante se deja enfriar y secar, y al final se solidifica en pastillas o en escamas. En un principio se llamó agar-agar, un término que se utiliza en Malasia para denominar a un alga local. Pero existen diferentes tipos de agar de acuerdo a las especificidades que cada uno tenga, sin embargo cada tipo de agar debe de cumplir con los requerimientos:
Fuente de energía.- Las bacterias pueden ser fotótrofas o quimiotótrofas. Las fototótrofas absorben energía del sol y las quimiotótrofas de compuestos orgánicos.
Fuente de carbono. Fuente de nitrógeno.- Las bacterias pueden obtener el nitrógeno atmosférico a través de las proteínas o por la degradación de aminoácidos o péptidos. Azufre y fosfatos.- La obtienen como elemento(S), y como fosfatos en sales (P).
Vitaminas. Agua.- Medio de transporte que permite una mejor absorción de los nutrimentos.También requiere de los requerimientos nutricionales óptimos para su desarrollo: Proteínas.- Se suministran generalmente peptonas, que se encuentran disponibles en el comercio, preparadas por digestión parcial de carne con enzimas peptídicas; consisten en polipéptidos, dipéptidos y aminoácidos. Carbohidratos.- Sumistran carbono para la síntesis, y además su fermentación libera energía utilizable en el metabolismo.
Medios diferenciales.- Son medios a los que se les han agregado ciertos que reaccionan con un tipo específico de bacterias. Ejem: Agar de McConckey, Agar EMB, Agar XLD.
Medios de enriquecimiento.- Son los medios que contienen alguna sustancia inhibidora por lo que se crea un medio favorable para límites mas estrechos de bacterias. Ejem: Agar S.S., Agar de Lowensten-Jensen.
Medios especiales.- Son los medios para comprobar una o más caracteríziticas bioquímicas. Ejem: Agar TSI, Agar CIT, Agar LIA, Agar MIO.
Medios inclinados.- Este tipo de cultivo es empleado principalmente para resembrar cepas aisladas, sea para identificación interior o para base cultivo.
Cultivos por agitación.- Este medio de cultivo es empleado particularmente en el aislamiento de anaerobios esporulado. Se calienta un tubo o botella a 50°C y luego se deja enfriar.
Cultivos por picadura.- En este método el material de laboratorio es colocado en un alambre recto e introducido al medio. El método puede ser también empleado para conservar los cultivos patrón.
Cultivos líquidos.- Al inocular en un medio líquido como el agua con peptona o el caldo con tioglicolato, el tubo se inclina y el material se extrae del asa por frotamiento contra la pared del tubo.
De acuerdo a las especifidades de cada medio pueden clasificarse en:
Medios básicos.- Son los medios más simples, contienen extracto de carne, peptona, sal y agua. El extracto o infusión de carne proporciona aminoácidos, vitaminas, sales y pequeñas cantidades de elementos como C, N y otros elementos. Ejem: Agar de infusión, Agar cerebro-corazón.
Medios enriquecidos.- Son aquellos medios básicos que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes. Ejem: Agar sangre y agar chocolate.
Medios selectivos.- Son medios de agar básico, enriquecidos agregándole ciertos reactivos que impiden el crecimiento de la mayoría de las bacterias y permitiendo el desarrollo de unas cuantas. Ejem: Agar con sangre y bilis al 40%, Agar sal y manitol.

C O N C L U S I Ó N.
En esta práctica se aprendió la importancia de preparar medios de cultivo, de que materiales pueden ser hechos, los distintos tipos de cultivos que pueden desarrollarse en el laboratorio, así como su clasificación, sus características principales, los distintos tipos que pueden servir para identificar diferentes bacterias, así como las condiciones que estos deben de reunir.














CBTis 155.

Nombres:
• Carrillo Martínez Carlos Arturo.
• Felipe Rojas Alexandro.
• Gutiérrez Hernández Monserrat Georgina.
• Jarquin Martínez Ibeth.
• Martínez Miranda Roberto.
• Rodríguez Vázquez Manuel Antonio.

Grupo: 4L2M.

Mesa: No. 4.

• Materia: Bacteriología.

• Profesor: Víctor Manuel Alfaro López.

Fecha: 16 de marzo del 2010.





Objetivo:

Aprender y realizar correctamente los distintos tipos de tinciones, las pruebas bioquímicas, conocimos las clasificaciones de distintas bacterias que se producen en distintos agares; aprendimos como se clasifican los agares y su procedimiento . También conocimos las bacterias que se encuentran en las pruebas bioquioquimicas.
Aprendimos los diferentes tipos de microorganismos que nos rodean, algunas bacterias; su clasificación, esto puede ser por la tribu en la que se encuentren, especie y genero. Como actúan en el ser humano y los diferentes organismos en nuestro cuerpo que hace que estemos protegidos contra ellas y los diferentes tipos de medios de cultivo, su calcificación y su importancia en la diagnosticación.


Introducción

En Este trabajo se mostrara Varias Cosas Sobre Bacteriología Desde Sus Ramas Derivadas Hasta Pruebas Bioquímicas y Sus Medios utilizados y la Clasificación Que Existen Entre ellos Los Que Son Para Pruebas Bioquímicas y los que no Son Como Medios Enriquecidos o de transporte, Etc.…

las Diferentes Tipos de Tinciones.
La Importancia que Debe Haber Ante el Saber Realizar un buen Frotis , la Diferenciación y Anatomía de la Bacteria

-Las Bacterias son Seres Vivos Al Igual que nosotros entonces , el por qué de no saber nada de ellas? Y Ser Tan Ignorante Frente al Tema...

Existen Más de 5 Tinciones para Realizar una Observación Bacteriana y el método más Usual la Tinción de Gram no Es La Mejor Contra Muchas Bacterias “BAAR” Por tal Motivo sea a Realizado Una Investigación Sobre la Tinción Acido Alcohol Acido Resistente Esta Demuestra tener También Importancia En El Laboratorio Actual y Su Realización


Índice.

1. Portada.
2. Hoja de datos personales.
3. Objetivo.
4. Introduccion.
5. Indice.
6. Tincion de Gram.
7. Tincion de Ziehl-Neelzen.
8. Composicion.
9. Tinción negativa o tinta china.
10. Azul de metileno.
11. Pruebas bioquímicas.
12. Agar citrato e indol.
13. Rojo metileno y vogues proskauer.
14. Pruebas bioquímicas convencionales.
15. Objetivo de preparación de medios de cultivo.
16. Agar y sus requerimientos.
17. Medios para pruebas bioquímicas.
18. Enterobacteria y géneros de bacilos.
19. Clasificación.
20. Características de la familia e infección.
21. Tipos de infección.
22. Sistema de defensa del organismo.
23. Transmisión de microorganismos.
24. Origen endógeno.
25. Flora normal de la piel.
26. Flora normal del aparato digestivo.
27. Medios de cultivo por su estado físico.
28. Por su utilidad- medios enriquecidos y ejemplos.
29. Medios selectivos.
30. Ejemplos de medios selectivos.
31. Medios diferenciales.
32. Ejemplos de medios diferenciales.
33. Medios de enriquecimiento y ejemplos.
34. Medios de transporte y ejemplos.
35. Medios de conservación.
36. Ejemplos de medios de conservación.
37. Diagrama de medios diferenciales y grupo coliformes.
38. Diagrama medios selectivos.
39. Conclusión.
40. Resumen general.
41. Resumen general.
42. Resumen general.
43. Resumen general.
44. Glosario.
45. Fichas bibliográficas.
46. Conclusión final.


TINCIÓN DE GRAM
LA TINCIÓN DE GRAM O COLORACIÓN DE GRAM ES UN TIPO DE TINCIÓN DIFERENCIAL EMPLEADO EN MICROBIOLOGÍA PARA LA VISUALIZACIÓN DE BACTERIAS, SOBRE TODO EN MUESTRAS CLÍNICAS. DEBE SU NOMBRE AL BACTERIÓLOGO DANÉS CHRISTIAN GRAM, QUE DESARROLLÓ LA TÉCNICA EN 1884. SE UTILIZA TANTO PARA PODER REFERIRSE A LA MORFOLOGÍA CELULAR BACTERIANA COMO PARA PODER REALIZAR UNA PRIMERA APROXIMACIÓN A LA DIFERENCIACIÓN BACTERIANA, CONSIDERÁNDOSE GRAM POSITIVA A LAS BACTERIAS QUE SE VISUALIZAN DE COLOR VIOLETA Y BACTERIA GRAM NEGATIVA A LAS QUE SE VISUALIZAN DE COLOR ROSA.
TÉCNICA
 PREPARAR EL FROTIS Y FIJARLO AL CALOR
 COLOCAR LA PREPARACIÓN FIJADA CON LA SOLUCIÓN DE CRISTAL VIOLETA DURANTE L’
 LAVAR CON SOLUCIÓN YODADA (LUGOL )
 CUBRIR EL FROTIS CON LUGOL DURANTE 1’
 ESCURRIR Y DECOLORAR POR ALCOHOL HASTA QUE NO ARRASTRE MÁS CRISTAL VIOLETA.
 LAVAR CON AGUA
 CONTRASTAR CON LA SOLUCIÓN DE FUCSINA POR 1’
 LAVAR CON AGUA, SECAR AL AIRE Y EXAMINAR CON OBJETIVO DE INMERSIÓN
BACTERIAS GRAM POSITIVAS EN MICROBIOLOGÍA, SE DENOMINAN BACTERIAS GRAM POSITIVAS A AQUELLAS BACTERIAS QUE SE TIÑEN DE AZUL OSCURO O VIOLETA POR LA TINCIÓN DE GRAM: DE AQUÍ EL NOMBRE DE "GRAM-POSITIVAS" O TAMBIÉN "GRAMPOSITIVAS". ESTA CARACTERÍSTICA ESTÁ ÍNTIMAMENTE LIGADA A LA ESTRUCTURA DE LA ENVOLTURA CELULAR POR LO QUE REFLEJA UN TIPO NATURAL DE ORGANIZACIÓN BACTERIANA. SON UNO DE LOS PRINCIPALES GRUPOS DE BACTERIAS, Y CUANDO SE TRATAN COMO TAXÓN SE UTILIZA TAMBIÉN EL NOMBRE DE POSIBACTERIA.
 LA ENVOLTURA CELULAR DE LAS BACTERIAS GRAM-POSITIVAS COMPRENDE LA MEMBRANA CITOPLASMÁTICA Y UNA PARED CELULAR COMPUESTA POR UNA GRUESA CAPA DE PEPTIDOGLUCANO, QUE RODEA A LA ANTERIOR. LA PARED CELULAR SE UNE A LA MEMBRANA CITOPLASMÁTICA MEDIANTE MOLÉCULAS DE ÁCIDO LIPOTEICOICO. LA CAPA DE PEPTIDOGLUCANO CONFIERE UNA GRAN RESISTENCIA A ESTAS BACTERIAS Y ES LA RESPONSABLE DE RETENER EL TINTE DURANTE LA TINCIÓN DE GRAM .
 BACTERIAS CLOSTRIDIUM PERFRINGENS (GRAM POSITIVAS)
BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
 LAS BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS SON AQUELLAS QUE PRESENTAN DOS MEMBRANAS LIPÍDICAS Y ENTRE ELLAS SE LOCALIZA UN FINA PARED CELULAR COMPUESTA FUNDAMENTALMENTE POR PEPTIDOGLUCANO ( AL SER FINA ESTA PARED, NO SE TIÑE DE VIOLETA O AZUL EN LA TINCIÓN ).
 ESTAS BACTERIAS SE TIÑEN DE ROSA.
MUCHAS ESPECIES DE BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS CAUSAN ENFERMEDADES. LOS COCOS GRAM-NEGATIVOS CAUSAN LA GONORREA (NEISSERIA GONORRHOEAE), MENINGITIS(NEISSERIA MENINGITIDIS) Y SÍNTOMAS RESPIRATORIOS (MORAXELLA CATARRHALIS), ENTRE OTROS. LOS BACILOS GRAM-NEGATIVOS INCLUYEN UN GRAN NÚMERO DE ESPECIES. ALGUNOS DE ELLOS CAUSAN PRINCIPALMENTE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS (HAEMOPHILUS INFLUENZAE, KLEBSIELLA PNEUMONIAE , LEGIONELLA PNEUMOPHILA, PSEUDOMONAS AERUGINOSA), ENFERMEDADES URINARIAS (ESCHERICHIA COLI, PROTEUS MIRABILIS, ENTEROBACTER CLOACAE, SERRATIA MARCESCENS) Y ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES (HELICOBACTER PYLORI, SALMONELLA ENTERITIDIS, SALMONELLA TYPHI). OTROS ESTÁN ASOCIADAS A INFECCIONES NOSOCOMIALES (ACINETOBACTER BAUMANII.
 BACTERIAS ESCHERICHIA COLI (GRAM NEGATIVAS) VISTAS AL MICROSCOPIO TRAS SER TEÑIDAS CON LA TINCIÓN DE GRAM
TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN
 LA TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN (BAAR) ES UNA TÉCNICA DE TINCIÓN DIFERENCIAL RÁPIDA Y ECONÓMICA, PARA LA IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS, POR EJEMPLO M. TUBERCULOSIS.
 FUE DESCRITA POR PRIMERA VEZ POR DOS MÉDICOS ALEMANES, FRANZ ZIEHL (1859 A 1926), UN BACTERIÓLOGO Y FRIEDRICH NEELSEN (1854 -1894), UN PATÓLOGO.
 LAS PAREDES CELULARES DE CIERTOS PARÁSITOS Y BACTERIAS. CONTIENEN ÁCIDOS GRASOS (ÁCIDOS MICÓLICOS) DE CADENA LARGA (50 A 90 ÁTOMOS DE CARBONO) QUE LES CONFIEREN LA PROPIEDAD DE RESISTIR LA DECOLORACIÓN CON ALCOHOL-ÁCIDO, DESPUÉS DE LA TINCIÓN CON COLORANTES BÁSICOS. POR ESTO SE DENOMINAN ÁCIDO-ALCOHOL RESISTENTE. LAS MICO BACTERIAS COMO M. TUBERCULOSIS Y M. MARINUM Y LOS PARÁSITOS COCCÍDEOS COMO CRYPTOSPORIDIUM SE CARACTERIZAN POR SUS PROPIEDADES DE ÁCIDO-ALCOHOL RESISTENCIA. LA COLORACIÓN CLÁSICA DE ZIEHL NEELSEN REQUIERE CALENTAMIENTO PARA QUE EL COLORANTE ATRAVIESE LA PARED BACTERIANA QUE CONTIENE CERAS.
 SE HA DESARROLLADO UNA COLORACIÓN DE ÁCIDO-ALCOHOL RESISTENCIA MODIFICADA QUE DIFERENCIA LAS ESPECIES DE NOCARDIA (BACTERIAS RAMIFICADAS FILAMENTOSAS CUYAS PAREDES CELULARES CONTIENEN ÁCIDOS-GRASOS DE UNOS 50 ÁTOMOS DE CARBONO), DE LOS ACTINOMICEOS (MUY SEMEJANTES PERO NO ÁCIDO-ALCOHOL RESISTENTES). NOCARDIA SPP SON DECOLORADAS POR LA MEZCLA ÁCIDO-ALCOHOL ESTÁNDAR PERO NO POR UN TRATAMIENTO MÁS SUAVE CON ÁCIDO SULFÚRICO 0,5 A 1%. ESTOS MICROORGANISMOS SE DENOMINAN ÁCIDO-ALCOHOL RESISTENTES PARCIALES O DÉBILES.
 EL FROTIS SE TIÑE DURANTE UNOS 5 MIN. CON CARBOL FUCSINA APLICANDO CALOR SUAVE. LAVAR CON AGUA. DECOLORAR CON ALCOHOL ETÍLICO 95% CON UN 3% DE CLH CONCENTRADO. LAVAR Y TEÑIR DURANTE 30-60 SEG. CON AZUL DE METILENO (COLOR DE CONTRASTE). LAVAR Y SECAR
TÉCNICA
 CUBRIR LA LAMINA PREVIA FIJACIÓN DE LA PREPARACIÓN POR CALOR CON LA FUCSINA FENICADA DE ZIEHL NEELSEN Y CALENTARLA HASTA QUE EMITA VAPORES, SIN QUE HIERVA, DURANTE TRES A CINCO MINUTOS, RESPONDIENDO CONSTANTEMENTE EL COLORANTE PARA EVITAR LA DESECACIÓN.
 LAVAR CON AGUA CORRIENTE.
 DECOLORAR CON EL ALCOHOL-ÁCIDO HASTA QUE NO HAYA MÁS SALIDA DE COLOR.
 LAVAR CON AGUA CORRIENTE.
 CONTRA TEÑIR CON LA SOLUCIÓN DE AZUL DE METILENO POR UN MINUTO.
 LAVAR CON AGUA, SECAR AL AIRE Y OBSERVAR POR INMERSIÓN.
 PUEDE UTILIZARSE EN LUGAR DE LA CARBO FUCSINA DE ZIEHL – NEELSEN LA DE KINYOUN, EN CUYO CASO NO ES NECESARIO EL CALENTAMIENTO.
COMPOSICIÓN :
– FUCSINA BÁSICA..... 4 G
– FENOL.................... 8 ML
– ALCOHOL ETÍLICO DE 95°....................... 20 ML
– AGUA DESTILADA... L00 ML
 LOS MICROORGANISMOS PERTENECIENTES AL GÉNERO MYCOBACTERIUM SON DESIGNADOS ACIDORRESISTENTES A CAUSA DE QUE UNA VEZ TEÑIDOS POR UN MÉTODO CONVENIENTE RETIENEN EL COLORANTE Y NO SON DECOLORADOS POR ACCIÓN DE LOS ÁCIDOS. LOS GÉRMENES ACIDORRESISTENTES (BACILOS DE LA TUBERCULOSIS Y DE LA LEPRA) APARECEN DE COLOR ROJO Y LOS NO ACIDORRESISTENTES DE AZUL, AL IGUAL QUE LAS CÉLULAS, LEUCOCITOS, ETC. DEL MATERIAL EN ESTUDIO.
IMAGEN: BGN Y LEVADURAS EN UNA TINCIÓN GRA
PARA LA TINCIÓN DEL BACILO TUBERCULOSO, LEPRA Y MICO BACTERIAS
Tinciones: Tinción negativa o TINTA CHINA
 Tinción de AZUL DE METILENO
 Tinción WRITE
Tinción Negativa o Tinta China
La tinción negativa es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células.
La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tinta china (que es una suspensión de partículas de carbono coloidal). La tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las células en la microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.

Tinción de Azul de Metileno
Azul de metileno
† Tinción positiva.
† Permite teñir el interior celular.
† Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o muertos).
† Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos.
† Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.

Tinción de Wright
Es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos, cortes histológicos y otro tipo de muestras biológicas. Este método tiene utilidad sobre todo para poner de manifiesto las ricketsias localizadas dentro de la célula huéspedes. La coloración se emplea también para teñir frotis de sangre en el examen para protozoos. Se puede emplear, como variaciones, otras coloraciones como es la técnica de citoconcentración para parásitos sanguíneos, la cual tiene un bajo coste y ofrece la posibilidad de aislar e identificar en el mismo sedimento el parásito principal, con excepción de los trofozoitos jóvenes y el plasmodium falciparum. Este método de tinción permite también la tinción diferencial de zonas con un alto contenido de ADN, y concretamente de uniones A-T. Esto permite distinguir perfectamente en microscopio óptico el núcleo celular, los cromosomas durante la mitosis, y en algunos casos, incluso el ADN mitocondrial (kinetoplasto de algunos protozoos, como Trypanosoma). Los cromosomas pueden ser tratados con varios compuestos químicos que producen la alternancia de bandas claras y oscuras a lo largo de los cromosomas. Cada cromosoma tiene un patrón de bandas característico, permitiendo que aberraciones estructurales como borrados, duplicaciones o sutiles translocaciones sean detectadas, al igual que permite la identificación de cromosomas marcadores.

Pruebas bioquímicas.

*Fermentan con producción de ácido y gas, la lactosa y un gran número de hidrocarbonatos.
* Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
 *Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
 *Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
 Procedimiento experimental


Inoculación de pruebas bioquímicas: a partir de un cultivo fresco de la cepa bacteriana (18 – 24 hrs.) se toma una muestra de una colonia con un asa en punta y se procede a inocular diversos medios de cultivo sólido de acuerdo al protocolo específico establecido para cada ensayo experimental.
 En el caso de las pruebas bioquímicas de tipo líquido (caldo rojo de metilo y caldo lactosa rojo de fenol), estas se inoculan a partir de un cultivo bacteriano en caldo.
 Incubación de las muestras: todos los tubos de ensayo inoculados se incuban a 37ºC por tiempos variables, dependiendo de la especificación de cada uno de los test bioquímicos utilizados.
 Ejemplo de inoculación en medio sólido:
Agar citrato.

La utilización de citrato como única fuente de carbono es una prueba útil en la identificación de enterobacterias. La utilización de citrato como única fuente de carbono se detecta en un medio de cultivo con citrato como única fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinización del medio. Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH 7,6.
 Procedimiento:
 Se inocula el agar inclinado en una sola estría en el pico. Utilizar un cultivo de 24 horas en un medio sólido y cuidando no arrastrar medio de cultivo, ya que se pueden producir falsos positivos por crecimiento a partir del medio de cultivo del inóculo. Incubar a 35°C durante 4 días. El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estría, acompañado o no de un viraje del indicador al azul.
 Resultados:
 (+)Klebsiella spp.




 ( - ) Escherichia Coli.


Indol

El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica importante para la identificación de muchas especies de microorganismos. La prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo de los reactivos de Kovacs y Ehrlich. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.
 Procedimiento:
 Inocular el caldo triptofano con el organismo en estudio e incubar a 35°C durante 18 a 24 horas. Al finalizar este período, añadir 5 gotas de reactivo de Kovacs por la pared interior del tubo. El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo, segundos después de añadir el reactivo indica la presencia de indol y una prueba positiva.
 Resultados:
 (+) Escherichia coli





 ( - ) Klebsiella pneumoniae



Rojo Metilo

Una de las características taxonómicas que se utilizan para identificar los diferentes géneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporción de productos de fermentación que se originan por la fermentación de la glucosa. Se conocen 2 tipos generales: La fermentación ácido-mixta y la fermentación del 2,3 butanodiol. En la fermentación ácido mixta se forman fundamentalmente láctico, acético y succínico, además de etanol, H2 y CO2. En la vía del butanodiol se forman cantidades menores de ácido (acetato y succinato) y los principales productos son el butanodiol, etanol, H2 y CO2.
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la producción de ácidos por la vía de fermentación ácido mixta.
Procedimiento:

Inocular el caldo Rojo Metilo con un cultivo puro de no más de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35°C durante 48 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubación agregar unas gotas del reactivo de rojo de metilo. La prueba es positiva si se desarrolla de un color rojo estable. Esto indica que la producción de ácido es suficiente para producir el viraje del indicador y el microorganismo fermentó la glucosa por la vía de ácido mixta. Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo.
 Resultados:
 (+) Escherichia coli





( - ) Enterobacter aerogenes
Vogues Proskauer

En la prueba de Voges-Proskauer se determina la vía de fermentación del butanodiol descripta en la prueba de rojo de metilo. El acetil-metil-carbinol (o acetoína) es un producto intermediario en la producción de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la acetoína es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.
 Procedimiento:
 Inocular el caldo RMVP con un cultivo puro de no más de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35°C durante 24 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubación transferir 1 ml del caldo RM/VP a un tubo limpio y agregar 0,6 ml de alfa-naftol al 5% y 0,2 ml de KOH al 40%. Agitar el tubo cuidadosamente para exponer el medio al oxígeno atmosférico y dejarlo reposar durante 10 a 15 minutos. El desarrollo de un color rojo-fucsia luego de 15 minutos indica la presencia de diacetilo, producto de oxidación de la acetoína y por lo tanto una prueba VP positiva.
 Resultados:
 (+) Enterobacter aerogenes





 (-)Escherichia coli





PRUEBAS BIOQUIMICAS CONVENCIONALES


Agar Triple Hierro-Triple Azúcar (Agar TSI o Triple Sugar Iron).
 Este medio se emplea para detectar la fermentación de lactosa, sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas y, también para detectar la producción de ácido sulfhídrico.
 Agar Hierro Lisina (Agar LIA o Lisyne Iron Agar).
 Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra en la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo.

Medio Movilidad-Indol-Ornitina (Medio MIO o Motility Indole Ornithine Médium).
 Se emplea para determinar la movilidad, presencia de una actividad de la enzima ornitina decarboxilasa y, la producción de indol.
 Agar Citrato de Simmons (Simmons Citrate Agar).
 Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio
 Agar SIM (Sulfide Indole Motility Medium).
 Medio que permite poner en evidencia la producción de indol, ácido sulfhídrico y movilidad de las bacterias.





Catalasa. Esta prueba sirve para comprobar la presencia de la enzima catalasa en preparaciones de microorganismos.
 Caldo RM – VP (Methyl Red and Voges Proskauer Test).
 Con estas dos pruebas se estudia qué tipo de fermentación (butilenglicólica o ácido mixta) realiza el microorganismo en estudio.
 La prueba de Voges-Proskauer sirve para comprobar la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, el acetilmetilcarbinol (acetoína) a partir de la fermentación (butilenglicólica) de la glucosa. La prueba del rojo de metilo sirve para comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación (ácido mixta) de la glucosa.
 Caldo Lactosa Rojo de Fenol (CLRF o Phenol Red Lactose Broth).
 Este medio permite evidenciar la presencia de bacterias fermentadoras del azúcar lactosa.


Preparación de medios de cultivo.
Bacteriología II.

O B J E T I V O
 El objetivo de la presente práctica es aprender a preparar correctamente los principales de medios de cultivo que se utilizan en el laboratorio de Bacteriología, como instrumentes de suma importancia en la dignosticación de bacterias patógenas dentro de los individuos. Asimismo, conocer los diferentes tipos de cultivo, su clacificación y su importancia en la diagnosticación.

I N T R O D U C C I Ó N

Un método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las células que se multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria. Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es imposible diferenciarlas sólo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus características bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo especiales. Así, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si está presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azúcares especiales que sólo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se añaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos ácidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentación, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: así, algunas bacterias con enzimas hemolíticas (capaces de romper los glóbulos rojos) producen hemólisis y cambios apreciables macroscópicamente en las placas de agar-sangre. Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiología de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que son sensibles esas bacterias
Los requerimientos necesarios para un cultivo de bacterias son:

Medio de carbono.
 Presencia o ausencia de oxigeno.
 Atmósfera adecuada.
 Agar-agar. Para un cultivo adecuado de bacterias y microorganismos, se utiliza el agar, un gel coloidal formado por hidratos de carbono, de extendido uso comercial, y que proviene de las paredes celulares de varias especies de algas rojas, en concreto de miembros orientales del género Gelidium. Se utiliza como agente solidificante en la preparación de dulces, cremas y lociones, así como en las conservas de pescado y carne; para texturizar y emulsionar los helados y postres congelados; para clarificar, durante el proceso de fabricación del vino y la elaboración de la cerveza; y también para dar apresto (almidonar) las telas. Además, es un excelente medio de cultivo de bacterias, ya que no se disuelve por el efecto de las sales, ni se consume por la acción de la mayoría de los microorganismos

El agar se extrae de las algas marinas haciéndolas hervir. Posteriormente, el producto resultante se deja enfriar y secar, y al final se solidifica en pastillas o en escamas. En un principio se llamó agar-agar, un término que se utiliza en Malasia para denominar a un alga local.
Pero existen diferentes tipos de agar de acuerdo a las especificidades que cada uno tenga, sin embargo cada tipo de agar debe de cumplir con los requerimientos:
 Fuente de energía.- Las bacterias pueden ser fotótrofas o quimiotótrofas. Las fototótrofas absorben energía del sol y las quimiotótrofas de compuestos orgánicos.




Fuente de carbono.
Fuente de nitrógeno.- Las bacterias pueden obtener el nitrógeno atmosférico a través de las proteínas o por la degradación de aminoácidos o péptidos.
Azufre y fosfatos.- La obtienen como elemento(S), y como fosfatos en sales (P).
 Vitaminas.
Agua.- Medio de transporte que permite una mejor absorción de los nutrimentos. También requiere de los requerimientos nutricionales óptimos para su desarrollo:
Proteínas.- Se suministran generalmente peptonas, que se encuentran disponibles en el comercio, preparadas por digestión parcial de carne con enzimas peptídicas; consisten en polipéptidos, dipéptidos y aminoácidos.
Carbohidratos.- Sumistran carbono para la síntesis, y además su fermentación libera energía utilizable en el metabolismo.
 Medios diferenciales.- Son medios a los que se les han agregado ciertos que reaccionan con un tipo específico de bacterias. Ejem: Agar de McConckey, Agar EMB, Agar XLD.
 Medios de enriquecimiento.- Son los medios que contienen alguna sustancia inhibidora por lo que se crea un medio favorable para límites más estrechos de bacterias. Ejem: Agar S.S., Agar de Lowensten-Jensen.
 Medios especiales.- Son los medios para comprobar una o más características bioquímicas. Ejem: Agar TSI, Agar CIT, Agar LIA, Agar MIO.


Medios Para Pruebas Bioquímicas


Medios inclinados.- Este tipo de cultivo es empleado principalmente para resembrar cepas aisladas, sea para identificación interior o para base cultivo.
Cultivos por agitación.- Este medio de cultivo es empleado particularmente en el aislamiento de anaerobios esporulado. Se calienta un tubo o botella a 50°C y luego se deja enfriar.
Cultivos por picadura.- En este método el material de laboratorio es colocado en un alambre recto e introducido al medio. El método puede ser también empleado para conservar los cultivos patrón.
Cultivos líquidos.- Al inocular en un medio líquido como el agua con peptona o el caldo con tioglicolato, el tubo se inclina y el material se extrae del asa por frotamiento contra la pared del tubo.
 De acuerdo a las especifidades de cada medio pueden clasificarse en:
Medios básicos.- Son los medios más simples, contienen extracto de carne, peptona, sal y agua. El extracto o infusión de carne proporciona aminoácidos, vitaminas, sales y pequeñas cantidades de elementos como C, N y otros elementos. Ejem: Agar de infusión, Agar cerebro-corazón.
Medios enriquecidos.- Son aquellos medios básicos que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes. Ejem: Agar sangre y agar chocolate.
Medios selectivos.- Son medios de agar básico, enriquecidos agregándole ciertos reactivos que impiden el crecimiento de la mayoría de las bacterias y permitiendo el desarrollo de unas cuantas. Ejem: Agar con sangre y bilis al 40%, Agar sal y manitol.


C O N C L U S I Ó N.

En esta práctica se aprendió la importancia de preparar medios de cultivo, de que materiales pueden ser hechos, los distintos tipos de cultivos que pueden desarrollarse en el laboratorio, así como su clasificación, sus características principales, los distintos tipos que pueden servir para identificar diferentes bacterias, así como las condiciones que estos deben de reunir


BACTERILOGIA.
ENTEROBACTERIAS.

SE DENOMINAN “ENTEROBACTERIAS” A UN GRUPO DE GÉRMENES QUE SON HUÉSPEDES NATURALES DEL APARATO INTESTINAL Y QUE INVADEN AL MISMO CAUSANDO UNA ENFERMEDAD.
PERTENECEN A DISTINTOS GÉNEROS Y ESTÁN CARACTERIZADOS POR SER BACILOS.
• RECTOS, MÓVILES, CAPSULADOS O NO.
• GRAM NEGATIVOS DE CRECIMIENTO FÁCIL EN MEDIOS COMUNES DE LABORATORIO.
• CON PRODUCCIÓN DE NITRITOS A PARTIR DE LOS NITRATOS.
• ENDOFENOLOXIDASA NEGATIVOS.
• DE FERMENTACIÓN VARIABLE EN LOS AZUCARES.
• SIEMPRE ATACAN A LA GLUCOSA.
• CON UNA ESTRUCTURA ANTIGÉNICA QUE PERMITE RELACIONAR VARIOS GÉNEROS ENTRE SÍ.
• TIENE UN CONTENIDO DE G + C EN EL DNA DE 39-59%
• DEFINIR A UN SIN NÚMERO DE ESPECIES Y DETERMINAR EN CASO DE AFECCIÓN NATURAL UNA RESPUESTA INMUNOLÓGICA CAPAZ DE CONDUCIR AL DIAGNOSTICO.

CLASIFICACION
LOS BACILOS ENTERICOS, SON EL GRUPO DE MICROORGANISMOS QUE MAS A SUFRIDO
CAMBIOS DE UBICACIÓN Y NOMENCLATURA.
BACTERIAS GRAMNEGATIVAS: BACTERIAS GRAMPOSITIVAS:
•PSEUDOMONAS •ESCHERICHIA COLI
•BRUSELLA •SHIGELLA
•BORDETELLA •SALMONELLA
•HEMOPHILLUS •KLEBSIELLA
•VIDRIO •ENTEROBACTER
•MICOBACTERIAS •PROTEUS
LA FAMILIA SE CLASIFICA EN BASE A CIERTAS CARACTERÍSTICAS Y CONTENIDO DE G+C EN CINCO GRUPOS PRIMARIOS O TRIBUS Y DOCE GÉNEROS.
CARACTERISTICAS DE LA FAMILIA
DE ACUERDO AL PUNTO DE VISTA MÉDICO, SE HABLA DE LA FLORA NORMAL Y PATOLÓGICA DEL INTESTINO DEL INDIVIDUO, DIVIDIENDO LOS AGENTES ENTÉRICOS EN CUATRO GRUPOS DE ACUERDO A SU ACCIÓN PATÓGENA Y CARACTERES CULTURALES MORFOLÓGICAS.
• GRUPO COLIFORME
• GRUPO SALMONELLA
• GRUPO BACILOS DISENTÉRICOS
• GRUPO CÓLERA
INFECCION
LA INFECCIÓN SE PRODUCE CUANDO CIERTOS AGENTES MICROBIANOS PENETRAN UN ORGANISMO, SE DESARROLLA Y MULTIPLICA PROVOCANDO UNA REACCIÓN EN EL CUERPO INVADIDO.
EL PROCESO INFECCIOSO RESULTA DE UN DESEQUILIBRIO ENTRE EL MICROORGANISMO Y EL HUÉSPED.
EL GRADO DE SEVERIDAD DE LA INFECCIÓN VARÍA DE ACUERDO A LA AGRESIVIDAD DEL MICROORGANISMO Y EL ESTADO INMUNOLÓGICO DEL HUÉSPED.
ENFERMEDAD
ES LA ROTURA DEL EQUILIBRIO FISIOLÓGICO, QUE PERTURBA EL ESTADO DE SALUD, LA CUAL PUEDE SER INFECCIOSA SI LA CAUSA DE ALTERACIÓN ES UN MICROORGANISMO.
LA ENFERMEDAD PUEDE SER:•ESPORÁDICA: CUANDO SE PRESENTA OCASIONALMENTE EN UNA COMUNIDAD.
•ENDÉMICA: OCURRE DE MANERA CONSTANTE.
•EPIDÉMICA: ATACA VARIAS REGIONES GEOGRÁFICAS.
• TIPOS DE INFECCIÓN: SI EN MICROORGANISMO INFECTARTE PERMANECE EN DETERMINADA ZONA DEL ORGANISMO, COMO EN EL CASO DE ABSCESOS, SE HABLA DE UNA INFECCIÓN LOCAL. Y SI APARECE POR DISTINTAS REGIONES DEL CUERPO SE DICE QUE ES GENERAL.
• INFECCIÓN PRIMARIA: CUANDO SE DEBE A UNA SOLA ESPECIE DE MICROORGANISMOS.
• INFECCIÓN MIXTA: CUANDO ES DE DOS O MÁS GÉRMENES
• INFECCIÓN SECUNDARIA: CUANDO LA INFECCIÓN PRIMARIA ES SEGUIDA POR LA INVASIÓN DE OTROS MICROORGANISMOS DE DIFERENTES ESPECIES.
• CUANDO UNA BACTERIA PASA AL TORRENTE SANGUÍNEO O CIRCULATORIO SIN LLEGAR A MULTIPLICARSE EN ÉL SE HABLA DE BACTERIEMIA, SI LO HACE SE DENOMINA SEPTICEMIA.
• Y SI SON GÉRMENES PIOGÉNICOS QUE VAN A INSTALARSE DESDE UN FOCO LOCAL A OTRO SITIO ORIGINANDO NUEVOS ABSCESOS SE DENOMINA PIEMIA.
• LOS FOCOS CREADOS A DISTANCIA SE CONOCEN COMO METASTÁTICOS.
• SE LLAMA TOXEMIA CUANDO LAS TOXINAS SON ABSORBIDAS Y CAUSAN TRASTORNOS.
• SE LE LLAMA SAPREMIA CUANDO LOS PRODUCTOS TÓXICOS TIENEN SU ORIGEN EN LA DESCOMPOSICIÓN DE TEJIDOS MUERTOS POR ACCIÓN DE BACTERIAS SAPROFITICAS.

LOS PERIODOS DE ENFERMEDAD INFECCIOSA SON:
• INCUBACIÓN: COMPRENDE EL TIEMPO DE ENTRADA TRANSCURRIDO DE LOS MICROORGANISMOS EN EL CUERPO HASTA LA APARICIÓN DE LOS SÍNTOMAS.
• PRODRÓMICO: SIGUE AL DE LA INCUBACIÓN CON MANIFESTACIONES GENERALES.
• INVASIÓN: DONDE LA ENFERMEDAD ALCANZA SU COMPLETO DESARROLLO.
• DECLINACIÓN: CUANDO LOS SÍNTOMAS EMPIEZAN A CEDER Y QUE PUEDE SER EN CRISIS (POCAS HORAS) O EN LISIS (ALGUNOS DÍAS).
SISTEMAS DE DEFENSA DEL ORGANISMO:
GLÁNDULAS LAGRIMALES:

PRODUCEN Y SECRETAN LAS LAGRIMAS, LAS CUALES CONSTITUYEN UNA IMPORTANTE DEFENSA A NIVEL OCULAR, YA SEA ACTUANDO EN FORMA DIRECTA A TRAVÉS DE SUS ENZIMAS O BIEN POR MEDIO DE UN PROCESO MECÁNICO DE BARRIDO DE GÉRMENES Y CUERPOS EXTRAÑOS. AMÍGDALAS Y ADENOIDES: ESTAS ESTRUCTURAS, FORMADAS POR TEJIDO LINFÁTICO, BRINDAN PROTECCIÓN A NIVEL DE PRODUCEN Y SECRETAN LAS LAGRIMAS, LAS CUALES CONSTITUYEN UNA IMPORTANTE DEFENSA A NIVEL OCULAR, YA SEA ACTUANDO EN FORMA DIRECTA A TRAVÉS DE SUS ENZIMAS O BIEN POR MEDIO DE UN PROCESO MECÁNICO DE BARRIDO DE GÉRMENES Y CUERPOS EXTRAÑOS. AMÍGDALAS Y ADENOIDES: ESTAS ESTRUCTURAS, FORMADAS POR TEJIDO LINFÁTICO, BRINDAN PROTECCIÓN A NIVEL DE FAUCES Y FOSAS NASALES, ACTUANDO COMO UNA IMPORTANTES BARRERA INMUNOLÓGICA AL IMPEDIR LA PROLIFERACIÓN DE MICROORGANISMOS QUE INGRESAN POR VÍA RESPIRATORIA U ORAL.
GANGLIOS LINFÁTICOS Y BAZO
• GANGLIOS LIFATICOS:
SON FORMACIONES OVALADAS DISTRIBUIDAS HABITUALMENTE A NIVEL DE LOS PUNTOS DE BIFURCACIÓN DE LOS CONDUCTOS LINFÁTICOS. ESTÁN COMPUESTOS POR TEJIDO ENCARGADO DE RECONOCER LAS PARTÍCULAS EXTRAÑAS Y PONER EN MARCHA LOS MECANISMOS NECESARIOS PARA SU ELIMINACIÓN.
BAZO: ES UN ÓRGANO VASCULAR, CÁPSULA DO, QUE FORMA PARTE DEL SISTEMA RETÍCULO ENDOTELIAL. ESTE CONSTITUIDO POR LA CORTEZA, INFILTRADA POR LINFOCITOS, Y LA MÉDULA QUE CONTIENE CÉLULAS LINFOIDES. ESTA ESTRUCTURA CAPTA ANTÍGENOS TRANSPORTADOS POR LA SANGRE Y TAMBIÉN ESTÁ ENCARGADA DE LA ELIMINACIÓN DE SUSTANCIAS TOXICAS.
INTESTINO GRUESO Y LA PIEL
• EN LA LUZ DE ESTE ÓRGANO PROLIFERAN BACTERIAS SAPROFITAS QUE INHIBEN EN MUCHAS OCASIONES LA LOCALIZACIÓN DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS, CAPACES DE PRODUCIR INFECCIONES NO SÓLO A NIVEL INTESTINAL SINO TAMBIÉN EN OTROS ÓRGANOS A PARTIR DE SU DISEMINACIÓN.
LA PIEL
• DEBIDO A QUE LA PIEL CUBRE LA SUPERFICIE DEL CUERPO, ES POSIBLE ASEVERAR QUE ESTE TEJIDO REPRESENTA LA PRIMERA BARRERA DE DEFENSA CONTRA LA AGRESIÓN DEL MEDIO EXTERNO. SOBRE ESTA ESTRUCTURA COEXISTEN UNA GRAN VARIEDAD DE GÉRMENES, LOS QUE ANTE LA INTEGRIDAD DE LA MISMA NO AFECTAN EL ESTADO NORMAL DEL INDIVIDUO, PERO ANTE DETERMINADAS SITUACIONES EN LAS QUE DICHA BARRERA SE ALTERA, PUEDEN ACTUAR COMO ORGANISMOS OPORTUNISTAS MODIFICANDO EL ESTADO DE EQUILIBRIO.
TRANSMISIÓN DE MICROORGANISMOS:
PUEDE SER DIRECTA O INDIRECTAMENTE, DE INDIVIDUOS Y ANIMALES ENFERMOS O PORTADORES DE MICROORGANISMOS, ASÍ COMO TENER SU ORIGEN EN GÉRMENES QUE NATURALMENTE HABITAN EN EL CUERPO O QUE SE INTRODUCEN COMO RESULTADO DE HERIDAS, INHALACIÓN ETC.
1.-CONTACTO DIRECTO:
• CONTACTO ENTRE PERSONAS: SÍFILIS, BLENORRAGIA, HERPES SIMPLE.
• GOTITAS EXPELIDAS AL TOSER: TOS FERINA, SARAMPIÓN Y PAROTIDITIS.
• TRANSMITIDAS POR ANIMALES: RABIA, TULAREMIA, CARBUNCO.
2.- CONTACTO INDIRECTO:
• POR AGUA Y ALIMENTOS: FIEBRE TIFOIDEA, PARATIFOIDEA Y DISENTERÍA BACILAR.
• POR LA LECHE: BRUCELOSIS, TUBERCULOSIS BOVINA.
• OBJETOS O FOMITES: (TOALLAS, JUGUETES, SABANAS) DIFTERIA Y MENINGITIS MENINGOCOCICA.
3.- A TRABES DE INSECTOS VECTORES:
• MOSCAS: (TRANSPORTACIÓN MECÁNICA) FIEBRE TIFOIDEA, DISENTERÍA BACILAR.
• MOSQUITOS (EL VIRUS SE MULTIPLICA EN SU INTERIOR, PERO NO PASA A LOS DESCENDIENTES): FIEBRE AMARILLA Y VARIAS ENCEFALITIS VIROSICAS.
• PULGAS (EL GERMEN SE MULTIPLICA EN ELLAS) PESTE BUBÓNICA Y TIFUS ENDÉMICO.
• GARRAPATAS (HAY PASAJE TRANSOVARICO) FIEBRE DE LAS MONTAÑAS ROCOSAS Y FIEBRE BOTONOSA.
4. - DE ORIGEN ENDÓGENO:
• PROCESOS DIVERSOS POR EL BACILO COLI Y POR COCOS GRAMPOSITIVOS QUE HABITAN EN LA GARGANTA Y EN LA PIEL.
• 5.- POR PUNCIONES, HERIDAS ETC.: TÉTANOS Y GANGRENA GASEOSA.
• 6.- POR EL POLVO INFECTADO: FIEBRE Q. E HISTOPLASMOSIS.
• 7.- CUANDO EL GERMEN INFECTARTE TIENE SU ORIGEN FUERA DEL CUERPO SE DICE QUE LA INFECCIÓN ES EXÓGENA.
8.- CUANDO LA INFECCIÓN ES DEBE
• IDA A MICROORGANISMOS QUE PARASITAN EL ORGANISMO SON INFECCIONES ENDÓGENAS
• PUERTA DE ENTRADA:
• SE DENOMINA ASÍ A LA VÍA QUE UTILIZAN LOS AGENTES INFECCIOSOS PARA ENTRAR EN EL ORGANISMO Y QUE CONDICIONA LA CAPACIDAD INFECCIOSA DE LOS MISMOS, AL PERMITIRLE SU LLEGADA A LAS CÉLULAS O TEJIDOS QUE LE SON AFINES.
• PIEL: SON CONTADOS LOS GÉRMENES CAPACES DE ATRAVESAR LA PIEL INTACTA COMO ES EL DE LA TULAREMIA Y DE LA ENFERMEDAD DE WEIL ( LEPTOSPIROSIS)
• OTROS COMO EL ESTAFILOCOCO, PENETRAN EN LOS FOLÍCULOS PILOSOS Y GLÁNDULAS SUDORÍPARAS PARA ALCANZAR TEJIDOS MÁS PROFUNDOS.
• CUANDO HAY LESIÓN DE CONTINUIDAD EN LA PIEL ( ABRASIONES, LACERACIONES, CORTADAS.) SON MUCHOS LOS MICROORGANISMOS QUE SE INTRODUCEN POR ESTA VÍA UNA INFECCIÓN FOCAL, O PROPAGÁNDOSE A OTRAS PARTES DEL CUERPO.
• APARATO DIGESTIVO: TIENEN ENTRADA POR ESTA VÍA LAS BACTERIAS QUE CAUSAN LAS FIEBRES TIFOIDEA Y PARATIFOIDEA Y LA DISENTERÍA BACILAR, QUE PENETRAN CON LOS ALIMENTOS Y BEBIDAS.
• APARATO RESPIRATORIO: ES LA PUERTA DE DISTINTOS AGENTES DE NEUMONÍA TUBERCULOSIS Y ASPERGILOSIS.
• TRACTO GENITAL: ENFERMEDADES VENÉREAS, VERRUGA GENITAL.
• FLORA NORMAL: COMPRENDE NUMEROSOS MICROORGANISMOS QUE HABITAN DE UNA MANERA MÁS O MENOS PERMANENTE EN EL ORGANISMO Y OTRA MÁS RESTRINGIDA QUE ES DE CARÁCTER TRANSITORIO.
• FLORA NORMAL DE LA PIEL: SE DISTINGUEN UNA TRANSITORIA Y OTRA MÁS O MENOS PERMANENTE, CUYO NÚMERO Y DIVERSIDAD DEPENDEN DEL CUIDADO PERSONAL Y AMBIENTE; POR LO COMÚN SE ENCUENTRAN:
– ESTAFILOCOCOS BLANCOS
– SARCINAS
– DIFTEROIDES
– BACILOS ESPORULADOS
– LEVADURAS (CÁNDIDA ALBICANS
• EN FORMA TRANSITORIA PUEDEN ENCONTRARSE:
• ESTAFILOCOCOS PIÓGENOS QUE HAN SIDO LLEVADOS POR LAS MANOS DESDE LA NARIZ HASTA LA PIEL.
• FLORA NORMAL DEL APARATO RESPIRATORIO:
• NARIZ: ESTAFILOCOCOS Y DIFTEROIDES
• RINOFARINGE: ESTREPTOCOCOS NO HEMOLÍTICOS Y DIPLOCOCOS GRAMNEGATIVOS. EN ELLA SE SITÚA UN GRAN NÚMERO DE BACTERIAS PATÓGENAS (PORTADORES SANOS O CONVALECIENTES) COMO:
• ESTREPTOCOCOS PNEUMONIAE
• NEISSERIA MENINGITIDES
• STREPTOCOCUS PYOGENES
• KLEBSIELLA PNEUMONIAE
• HAEMOPHILUS INFLUENZAE

FLORA NORMAL DEL APARATO DIGESTIVO:
• BOCA: SE ENCUENTRAN DIFERENTES CLASES DE HONGOS Y BACTERIAS, COMÚNMENTE EN ENCÍAS, ESPACIOS INTERDENTALES Y CRIPTAS AMIGDALINAS PERO EN GENERAL LA FLORA DEL APARATO DIGESTIVO ESTÁ FORMADA POR:
• ESTAFILOCOCOS
• ESTREPTOCOCOS
• BACILOS GRAMPOSITIVOS
• BACILOS FUSIFORMES Y ESPIROQUETA QUE JUNTO A LOS ANTERIORES FORMAN EL GRUPO SINÉRGICO FUSOESPIROQUETAL ETC.
• ESTOMAGO: ESTA LIBRE DE GÉRMENES LOS QUE LLEGAN INGERIDOS CON ALIMENTOS, BEBIDAS, Y SECRECIONES DE LA GARGANTA SON DESTRUIDOS POR EL JUGO GÁSTRICO.
• INTESTINO: SUS PRIMERAS PORCIONES SE PUEDEN CONSIDERAR ESTÉRILES.
• INTESTINO GRUESO: ENTEROCOCOS. ESTAFILOCOCOS, GÉRMENES AEROBIOS ESPORULADOS (DIVERSOS TIPOS DE CLOSTRIDIUM ENTRE ELLOS C. TETAN) LACTOBACILOS, BACILO COLI, Y OTRAS ESPECIES DE LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE.
• ENTRE LOS HONGOS SE ENCUENTRAN: CÁNDIDA, TRIPTOCOCUS, PENICILLUM, ASPERGILLUS, Y GEOTRICHUM
• LA FLORA INTESTINAL DE LOS RECIÉN NACIDOS CONSISTE EN SU MAYOR PARTE DE BIFIDOBACTERIUM (LACTOBACILLUS BIFIDUM SI SON AMAMANTADOS) O DE LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS JUNTO A BACILOS CONIFORMES, ENTEROCOCOS, BACILOS AEROBIOS Y ANAEROBIOS SI SON ALIMENTADOS CON BIBERÓN.
MEDIOS DE CULTIVO.


ATENDIENDO A SU ESTADO FÍSICO:•Líquidos: favorecen mucho el desarrollo y multiplicación de las bacterias porque al difundirse estas por todo el medio encuentran fácilmente las sustancias que necesitan para nutrirse. No contienes agar.
•Sólidos: contienen de 15 a 17 g de agar por litro. Las bacterias crecen con mayor dificultad; no obstante, son de gran utilidad para el estudio de las características de crecimiento, de la producción de hemólisis y otras peculiaridades.
•Semisólidos: se utilizan mucho para observar la movilidad de los microorganismos. Contienen agar en una proporción de 3 a 5 g. por litro.

ATENDIENDO A SU UTILIDAD:

A) MEDIOS ENRIQUECIDOS: son medios generales a los que se les añade ciertos productos (sangre, suero, glucosa,...), favoreciendo así el crecimiento de ciertos microorganismos muy exigentes. Ejemplos: agar-glucosa (agar nutritivo añadido de glucosa), agar sangre (agar nutritivo añadido de sangre), agar chocolate, etc.

Agar nutritivo
• Composición: extracto de carne, peptona, cloruro sódico, agar y agua destilada.
• Es un medio de cultivo general. Sirve como base para la preparación de otros medios enriquecidos y selectivos.

Agar sangre


• Composición: extracto de carne, peptona, cloruro sódico, sangre, agar y agua destilada.
• Es un medio enriquecido utilizado para el cultivo de microorganismos exigentes, así como para estudiar la actividad hemolítica.
• El medio base utilizado con mayor frecuencia para la fabricación de agar sangre es el TSA (agar tripticasa soja), al que se adiciona sangre desfibrinada de
• carnero, conejo o caballo en una proporción del 5- 10%.La sangre se añade al agar esterilizado y enfriado a 45-50º C, evitando la formación de burbujas. La sangre humana procedente de banco tiene el inconveniente de contener citrato, que puede inhibir el crecimiento de algunos microorganismos

Agar chocolate

• Composición: extracto de carne, peptona, cloruro sódico, sangre, agar y agua destilada.
• Lleva como base agar nutritivo, al que se agrega sangre desfibrinada cuando el medio está a una temperatura de aproximadamente 80º C. El calentamiento tiene como fin la liberación de los factores X ( hemina) y V (difosfo-piridín-adenínnucleótido), necesarios para el desarrollo de algunos microorganismos. Está especialmente indicado para Neisseria y Haemophilus.

B) MEDIOS SELECTIVOS: estos medios contienen componentes que inhiben el desarrollo de ciertos microorganismos, lo cual permite aislar el microorganismo que se busca. Entre estos medios podemos citar: agar Salmonella-Shigella (agar SS, selectivo para Salmonellas y Shigellas), agar MacConkey (se utiliza para el aislamiento de Enterobacterias), agar de Thayer-Martin (selectivo para Neisseria), agar Manitol salado (Chapman, selectivo de Estafilococos coagulasa positivos), agar de Lowenstein-Jensen (selectivo para el cultivo de micobacterias, especialmente Mycobacterium tuberculosis, agar de Sabouraud (para el cultivo de la mayoría de las levaduras y hongos patógenos).
Agar salmonella y shigella

• Composición: extracto de carne, peptona, lactosa, sales biliares, citrato sódico, citrato férrico, tiosulfato sódico, verde brillante, rojo neutro, agar y agua destilada.
• Es un medio diferencial selectivo utilizado para el aislamiento de Salmonellas y Shigella. El desarrollo de otros bacilos gram negativos y de cocos gram positivos
• está inhibido por el verde brillante, las sales biliares y las elevadas concentraciones de tiosulfato y citrato
Agar Mac conkey
• Composición: peptona, lactosa, cloruro sódico, sales biliares, cristal violeta, rojo neutro, agar y agua destilada.
• Es el medio primario selectivo y diferencial que se emplea más a menudo para el aislamiento y diferenciación de bacilos entéricos gram negativos fermentadores y no fermentadores de lactosa. Las sales biliares y el cristal violeta actúan como inhibidores de gram positivos. Las bacterias que fermentan la lactosa producen colonias de color rojo que pueden estar rodeadas de una zona opaca debida a la precipitación de las sales biliares; las no fermentadoras dan colonias incoloras más o menos transparentes
Agar Manitol Salado
• Composición: extracto de carne, peptona, cloruro sódico, manitol, rojo fenol, agar y agua destilada.
• Es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Staphylococcus, basado en la tolerancia que poseen a una alta concentración de cloruro sódico (7,5%).
• Sirve también como medio diferencial de cepas fermentadoras del manitol.
• Staphylococcus aureus en condiciones anaerobias es la única especie del género que produce esta fermentación.
Agar De Lowenstein-jensen
Composición: fosfato monopotásico, sulfato magnésico, citrato magnésico, asparagina, fécula de patata, glicerina, verde malaquita, huevo y agua destilada.

Es un medio utilizado para el cultivo de Mycobacterium. En este medio también pueden crecer y diferenciarse las especies del género Nocardia. Se debe esterilizar por tindalización.

Agar sabouraud

Composición: peptona, glucosa, agar y agua destilada.
Este medio se adapta particularmente al cultivo de la mayoría de levaduras y hongos patógenos. El medio contiene una cantidad mínima de nutrientes y un pH ácido (5,6) que lo hace selectivo. Suele adicionarse de antibióticos (gentamicina, cloranfenicol) para potenciar su selectividad
C) MEDIOS DIFERENCIALES: son aquéllos en los que además de crecer las bacterias, al actuar éstas sobre alguno de los componentes específicos del medio, demuestran alguna de sus propiedades bioquímicas. Contienen azúcares e indicadores, concebidos para provocar una respuesta bioquímica conocida (si la bacteria es capaz de fermentar el azúcar que lleva el medio, se producirá una acidificación del medio con el consiguiente viraje de color del medio por el cambio de pH). Ejemplos:Agar hierro de Kligler, Agar de MacConkey (diferencia los bacilos entéricos fermentadores y no fermentadores de la lactosa. Fermentadores de lactosa---> colonias rosas; No fermentadores de lactosa (lactosa negativos) ---> colonias incoloras).

Agar Hierro de Kligler

El Agar Hierro de Kligler es un medio empleado para la diferenciación de cultivos puros de bacilos Gram negativos en base a su capacidad para fermentar la dextrosa y la lactosa y a la producción de sulfuro de hidrógeno

Agar Mac Conkey
Composición: peptona, lactosa, cloruro sódico, sales biliares, cristal violeta, rojo neutro, agar y agua destilada.
Es el medio primario selectivo y diferencial que se emplea más a menudo para el aislamiento y diferenciación de bacilos entéricos gram negativos fermentadores y no fermentadores de lactosa. Las sales biliares y el cristal violeta actúan como inhibidores de gram positivos. Las bacterias que fermentan la lactosa producen colonias de color rojo que pueden estar rodeadas de una zona opaca debida a la precipitación de las sales biliares; las no fermentadoras dan colonias incoloras más o menos transparentes

D) MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO: son medios líquidos que favorecen o permiten la multiplicación de unas bacterias, inhibiendo parcial o totalmente la de otras. Ejemplos: agua de peptona alcalina (favorece la multiplicación de Vibrio cholerae), caldo selenito (favorece el crecimiento de Salmonellas y Shigellas, fundamentalmente Salmonellas).

Caldo Selenito

• Composición: triptona, fosfato disódico, lactosa, selenito sódico y agua destilada.
• Se utiliza para el enriquecimiento de Salmonella. El selenito presente en el medio inhibe a otras bacterias entéricas en las primeras horas de incubación.
Agua De Peptona Alcalina

• Medio de enriquecimiento utilizado para la búsqueda de Vibro sp. a partir de muestras clínicas y de alimentos.
• La viabilidad de los vibrios se mantiene intacta a pH alcalino, y este medio ha sido recomendado por numerosos autores para incrementar la recuperación de los mismos en materia fecal y otras muestras.

) MEDIOS DE TRANSPORTE: se utilizan para asegurar la viabilidad de las bacterias desde el momento de la toma de las muestras hasta su posterior siembra en el laboratorio o para su envío de unos laboratorios a otros.
Actualmente los medios de transporte más utilizados son los de Stuart, Amies, y el medio de Cary-Blair.
Medios de transporte Stuart
El Medio de Transporte de Stuart es utilizado para la recolección, transporte y preservación de muestras microbiológicas
Medio De Transporte Amies
El medio de transporte AMIES permite la supervivencia de organismos incluso hasta 48 horas. Es un medio apto para la conservación de una gran parte de patógenos como Trichomonas Neisseria, Haemophilus Salmonella, etc. Se presentan con una esponja especial para mantener el medio líquido (sin agar). Adecuado para extensiones directas en portas.
F) MEDIOS DE CONSERVACIÓN: son una variación de los medios de transporte. Aseguran las características morfológicas y fisiológicas de las bacterias por un periodo largo de tiempo. Ejemplo: agar de tripticasa y soja. Un gran número de medios de cultivo utilizados en el laboratorio de microbiología se podrían englobar en varios de los grupos anteriormente expuestos. Ej.: agar sangre, es un medio enriquecido y diferencial.

Agar tripticasa y soja• Composición: tripticasa, soja y agua destilada.
• Es un medio de uso general. Se puede adicionar de agar para obtener un medio sólido que, dispuesto en tubos inclinados, es de utilidad para el mantenimiento de microorganismos. Si se le añade cistina se obtiene un medio más reducido y capaz de conservar microorganismos que requieren bajas concentraciones de oxígeno.
Colonias de aspecto rugoso en agar tripticasa soya
Agar sangre
• Composición: extracto de carne, peptona, cloruro sódico, sangre, agar y agua destilada.
• Es un medio enriquecido utilizado para el cultivo de microorganismos exigentes, así como para estudiar la actividad hemolítica.
• El medio base utilizado con mayor frecuencia para la fabricación de agar sangre es el TSA (agar tripticasa soja), al que se adiciona sangre desfibrinada de carnero, conejo o caballo en una proporción del 5- 10%.La sangre se añade al agar esterilizado y enfriado a 45-50º C, evitando la formación de burbujas. La sangre humana procedente de banco tiene el inconveniente de contener citrato, que puede inhibir el crecimiento de algunos microorganismos

Conclusión

Este Trabajo fue Realizado con el Fin de dar a entender a todos la importancia de la bacteriología, y Explicar a Varios Cosas Nuevas o Ampliar la Información ya sabida del Lector
y Aprender a Diferenciar variedad de temas en la rama de bacteriología Desde Una Bacteria hasta los Reactivos para una Tinción y una Amplia Capacidad de Aprendizaje Sobre Los Temas Descritos.
Y gracias a todo el esfuerzo que desempeño cada equipo fue más claro los temas aunque en algunos les falto mas información pero lo esencial ya lo tenemos claro.
Creemos que saldrá bien el trabajo en la práctica y pues veremos lo resultados y esperemos que todo salga bien, además de que observaremos las distintas clases se bacterias, ser amas fácil reconocer ya que tenemos en conocimiento la familia y genero su clasificación de cada una.
Y ya sabemos realizar los medios de cultivo y las pruebas bioquímicas.


RESUMEN GENERAL.
TINCION DE GRAM

Se debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Es utilizada para referirse a la morfología celular bacteriana y poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose gram positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y bacteria gram negativa a las que se visualizan de color rosa.
Pasos a seguir para realizar la tinción de GRAM:
 Preparar el frotis y fijarlo al calor
 Colocar la preparación fijada con la solución de cristal violeta durante l’
 Lavar con solución yodada (Lugol )
 Cubrir el frotis con Lugol durante 1’
 Escurrir y decolorar por alcohol hasta que no arrastre más cristal violeta.
 Lavar con agua
 Contrastar con la solución de fucsina por 1’
 Lavar con agua, secar al aire y examinar con objetivo de inmersión.
Se denominan bacterias Gram positivas a aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta, La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La capa de peptidoglucano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram. Incluyen especies tanto móviles (vía flagelos) como inmóviles con forma de bacilo (Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Lactobacillus, Listeria) o coco (Staphylococcus, Streptococcus.
 Las Bacterias Gram-Negativas son aquellas que presentan dos membranas lipídicas y entre ellas se localiza un fina pared celular compuesta fundamentalmente por peptidoglucano (al ser fina esta pared, no se tiñe de violeta o azul en la tinción).Estas bacterias se tiñen de Rosa. Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades.
Tinción De Ziehl Neelsen La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, para la identificación de microorganismos patógenos, Fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un bacteriólogo y Friedrich Neelsen (1854 -1894), un patólogo.
 Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias. Contienen ácidos grasos (ácidos micólicos) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. La coloración clásica de Ziehl Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.
 El frotis se tiñe durante unos 5 min. con Carbol fucsina aplicando calor suave. Lavar con agua. Decolorar con alcohol etílico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y teñir durante 30-60 seg. Con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar y secar
PASOS PARA LA TECNICA DE ZIEHL-NEELSEN. Cubrir la lamina previa fijación de la preparación por calor con la fucsina fenicada de Ziehl Neelsen y calentarla hasta que emita vapores, sin que hierva, durante tres a cinco minutos, respondiendo constantemente el colorante para evitar la desecación.
 Lavar con agua corriente.
 Decolorar con el alcohol-ácido hasta que no haya más salida de color.
 Lavar con agua corriente.
 Contra teñir con la solución de azul de metileno por un minuto.
 Lavar con agua, secar al aire y observar por inmersión.
 Puede utilizarse en lugar de la Carbo fucsina de Ziehl – Neelsen la de Kinyoun, en cuyo caso no es necesario el calentamiento.
Tinción Negativa o Tinta China
Las células se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tinta china (que es una suspensión de partículas de carbono coloidal).
Tinción de Azul de Metileno
Tinción positiva. Permite teñir el interior celular. Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos.
Tinción de Wright
Es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos, cortes histológicos y otro tipo de muestras biológicas, Este método de tinción permite también la tinción diferencial de zonas con un alto contenido de ADN, y concretamente de uniones A-T. Esto permite distinguir perfectamente en microscopio óptico el núcleo celular, los cromosomas durante la mitosis, y en algunos casos, incluso el ADN mitocondrial (kinetoplasto de algunos protozoos, como Trypanosoma). Los cromosomas pueden ser tratados con varios compuestos químicos que producen la alternancia de bandas claras y oscuras a lo largo de los cromosomas.

PRUEBAS BIOQUIMICAS.
Fermentan con producción de ácido y gas, la lactosa y un gran número de hidrocarbonatos.
* Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
 *Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
 Inoculación de pruebas bioquímicas: apartar de un cultivo fresco de la cepa bacteriana (18 – 24 hrs.) se toma una muestra de una colonia con un asa en punta y se procede a inocular diversos medios de cultivo sólido de acuerdo al protocolo específico establecido para cada ensayo experimental.
 Incubación de las muestras: todos los tubos de ensayo inoculados se incuban a 37ºC por tiempos variables, dependiendo de la especificación de cada uno de los test bioquímicos utilizados.
 La utilización de citrato como única fuente de carbono es una prueba útil en la identificación de enterobacterias, Se inocula el agar inclinado en una sola estría en el pico. Utilizar un cultivo de 24 horas en un medio sólido y cuidando no arrastrar medio de cultivo, ya que se pueden producir falsos positivos por crecimiento a partir del medio de cultivo del inóculo. Incubar a 35°C durante 4 días. El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estría, acompañado o no de un viraje del indicador al azul.
 El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco. Inocular el caldo triptofano con el organismo en estudio e incubar a 35°C durante 18 a 24 horas. Al finalizar este período, añadir 5 gotas de reactivo de Kovacs por la pared interior del tubo. El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo, segundos después de añadir el reactivo indica la presencia de indol y una prueba positiva.
ROJO METILENO.
Una de las características taxonómicas que se utilizan para identificar los diferentes géneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporción de productos de fermentación que se originan por la fermentación de la glucosa. Se conocen 2 tipos generales: La fermentación ácido-mixta y la fermentación del 2,3 butanodiol. En la fermentación ácido mixta se forman fundamentalmente láctico, acético y succínico, además de etanol, H2 y CO2. En la vía del butanodiol se forman cantidades menores de ácido (acetato y succinato) y los principales productos son el butanodiol, etanol, H2 y CO2.
Inocular el caldo Rojo Metilo con un cultivo puro de no más de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35°C durante 48 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubación agregar unas gotas del reactivo de rojo de metilo. La prueba es positiva si se desarrolla de un color rojo estable. Esto indica que la producción de ácido es suficiente para producir el viraje del indicador y el microorganismo fermentó la glucosa por la vía de ácido mixta. Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo.
En la prueba de Voges-Proskauer se determina la vía de fermentación del butanodiol descripta en la prueba de rojo de metilo.
 Inocular el caldo RMVP con un cultivo puro de no más de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35°C durante 24 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubación transferir 1 ml del caldo RM/VP a un tubo limpio y agregar 0,6 ml de alfa-naftol al 5% y 0,2 ml de KOH al 40%. Agitar el tubo cuidadosamente para exponer el medio al oxígeno atmosférico y dejarlo reposar durante 10 a 15 minutos. El desarrollo de un color rojo-fucsia luego de 15 minutos indica la presencia de diacetilo, producto de oxidación de la acetoína y por lo tanto una prueba VP positiva.

 Agar Triple Hierro-Triple Azúcar (Agar TSI o Triple Sugar Iron).
 Este medio se emplea para detectar la fermentación de lactosa, sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas y, también para detectar la producción de ácido sulfhídrico.
 Agar Hierro Lisina (Agar LIA o Lisyne Iron Agar).
 Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra en la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo.
 Medio Movilidad-Indol-Ornitina (Medio MIO o Motility Indole Ornithine Médium).
 Se emplea para determinar la movilidad, presencia de una actividad de la enzima ornitina decarboxilasa y, la producción de indol.
 Agar SIM (Sulfide Indole Motility Medium).
 Medio que permite poner en evidencia la producción de indol, ácido sulfhídrico y movilidad de las bacterias.
Se denominan “Enterobacterias” a un grupo de gérmenes que son huéspedes naturales del aparato intestinal y que invaden al mismo causando una enfermedad.
Pertenecen a distintos géneros y están caracterizados por ser bacilos.
Móviles, gram (-), atacan a glucosa, Con una estructura antigénica que permite relacionar varios géneros entre sí. Los BACILOS ENTERICOS, son el grupo de microorganismos que más a sufrido cambios de ubicación y nomenclatura. Ej. Gram (-)= Escherichia Coli, Gram (+)=Brusella.
El proceso infeccioso resulta de un desequilibrio entre el microorganismo y el huésped. La infección se produce cuando ciertos agentes microbianos penetran un organismo, se desarrolla y multiplica provocando una reacción en el cuerpo invadido.
La enfermedad puede ser:
•Esporádica: Cuando se presenta ocasionalmente en una comunidad.
•Endémica: Ocurre de manera constante.
•Epidémica: Ataca varias regiones geográficas.
Tipos de infecciones:• Infección primaria: cuando se debe a una sola especie de microorganismos.
• Infección mixta: cuando es de dos o más gérmenes
• Infección secundaria: cuando la infección primaria es seguida por la invasión de otros microorganismos de diferentes especies.
• Cuando una bacteria pasa al torrente sanguíneo o circulatorio sin llegar a multiplicarse en él se habla de bacteriemia, si lo hace se denomina septicemia.
Los periodos de enfermedad infecciosa son:
• INCUBACIÓN: Comprende el tiempo de entrada transcurrido de los microorganismos en el cuerpo hasta la aparición de los síntomas.
• PRODRÓMICO: Sigue al de la incubación con manifestaciones generales.
• INVASIÓN: Donde la enfermedad alcanza su completo desarrollo.
• DECLINACIÓN: Cuando los síntomas empiezan a ceder y que puede ser en crisis (pocas horas) o en lisis (algunos días).
Medios enriquecidos: Son medios generales a los que se les añade ciertos productos (sangre, suero, glucosa,...), favoreciendo así el crecimiento de ciertos microorganismos. Ejemplo: Agar sangre, agar chocolate, y agar nutritivo.
Medios selectivos: Estos medios contienen componentes que inhiben el desarrollo de ciertos microorganismos, lo cual permite aislar el microorganismo que se busca. Ejemplo: agar MacConkey.
Medios diferenciales: Son aquéllos en los que además de crecer las bacterias, al actuar éstas sobre alguno de los componentes específicos del medio, demuestran alguna de sus propiedades bioquímicas. Contienen azúcares e indicadores, concebidos para provocar una respuesta bioquímica. Ejemplo: Ejemplos: Agar hierro de Kligler, Agar de MacConkey.
Medios de enriquecimiento: Son medios líquidos que favorecen o permiten la multiplicación de unas bacterias, inhibiendo parcial o totalmente la de otras. Ejemplos: agua de peptona alcalina.
Medios de transporte: Se utilizan para asegurar la viabilidad de las bacterias desde el momento de la toma de las muestras hasta su posterior siembra en el laboratorio o para su envío de unos laboratorios a otros. Ejemplo: Stuart, Amies, y el medio de Cary-Blair.
Medios de conservación: Son una variación de los medios de transporte. Aseguran las características morfológicas y fisiológicas de las bacterias por un periodo largo de tiempo. Ejemplo: agar de tripticasa y soja.


Glosario:

Posibacteria: Son uno de los principales grupos de bacterias.
Peptidoglucano o mureína: es un copolímero formado por una secuencia alternante de N-acetil-glucosamina y el ácido N-acetilmurámico unidos mediante enlaces β-1,4. La cadena es recta y no ramificada. Constituye la estructura básica de la pared celular de las bacterias y de las Prochlorophyta. Las arqueobacterias no poseen mureína, sino pseudopeptidoglicano formado por N-acetil-glucosamina unida a N-acetiltalosaminomurámico mediante enlace β-1,3.
Acido linoleico: (del griego λινων (linon) lino, cuya semilla es la linaza y ελαια (elaia) aceite de oliva o simplemente aceite) es un ácido graso esencial para el organismo humano, lo cual quiere decir que el organismo no puede sintetizarlo y tiene que ser ingerido por la dieta. Es un ácido graso poliinsaturado, con dos dobles enlaces.
Actinomyces: es un género de bacterias definido por Harz en 1877, del tipo gram-positivo. Algunas especies son anaerobias, mientras que otras son facultativas anaerobias.
Rickettsia:es un género de bacterias (colectivamente denominadas rickettsias) que pertenece a la familia Rickettsiaceae (junto con los géneros Orientia, Coxiella y Ehrlichia). Las rickettsias son parásitos intracelulares obligados, muy pequeñas, Gram-negativas y no forman esporas.
Inóculos: (pequeño volumen que contiene microorganismos en suspensión) desde la solución de trabajo también llamada “solución madre” al medio de cultivo (sólido o líquido) o de un medio a otro (resiembra).
Citocromos: son proteínas de color oscuro que desempeñan una función vital en el transporte de energía química en todas las células vivas. Las células animales obtienen la energía de los alimentos mediante un proceso llamado respiración aerobia; las plantas capturan la energía de la luz solar por medio de la fotosíntesis.
Citrato: Sales del acido cítrico, buenos reguladores de acidez.
Aerobios: Organismos que necesitan de oxigeno diatomico para vivir o desarrollarse.
Enterobacterias: Familia gran negativas, 30 generos, 100 especies, morfología de cocos y bacilos.
Fomites: Cuando la gripe es transmitida por la sangre1 y por las superficies u objetos contaminados con el virus.
Hemina o emina: antigua medida de volumen que se usó en varias provincias de Castilla y León. Se documenta en la regla monástica femenina, transcrita en el año 976 para ser observada en el monasterio de las Santas Nunilo y Alodia, cerca de Nájera, que permitía a las monjas que bebieran la tercera parte de una emina, ración marcada por San Benito para los monasterios masculinos.
Gentamicina: es un aminoglucósido. Se emplea como antibiótico para erradicar infecciones en el ojo contra bacterias sensibles. También sirve para tratar diversas enfermedades graves de piel, pulmón, estómago, vías urinarias y sangre.







Fichas Bibliográficas:
http://www.monografias.com/trabajos15/tinciones/tinciones.shtml.
http://funciones-laboratorio.blogspot.com/2008/01/tipos-de-tinciones-tincin-gram.html.
http://funciones-laboratorio.blogspot.com/2008/02/tipos-de-tinciones-tincin-ziehl-nielsen.html.
www.elergonomista.com/.../tinciones.htm.
html.rincondelvago.com/microbiologia_13.html.
http://es.answers.yahoo.com/question/index?qid=20090822102148AACr7E0.
www.bio-nica.info/Biblioteca/TincionBacterias.pdf
www.slideshare.net/.../tinciones-diferenciales-aspectos-tecnicos-
www.emagister.com/tincion-esporas-cursos-1047553.htm
www.bio-nica.info/Biblioteca/TincionBacterias.pdf
html.rincondelvago.com/pruebas-bioquimicas.html
www.scribd.com/.../Medios-de-Cultivo-y-Pruebas-Bioquimicas
perso.wanadoo.es/microdominguez/a.htm
mail.fq.edu.uy/~microbio/MGral/practico/segundociclo.doc
www.slideshare.net/.../pruebas-bioqumicas-y-medios-de-cultivo-en-bacterias
www.monografias.com
www.uprm.edu/biology/.../pruebas.htm
www.joseacortes.com/.../pruebasbioq/index.htm
www.cenavece.salud.gob.mx/indre/descargas/.../bacteriologia.pdf
www.infored.com.mx/bacteriologia/
html.rincondelvago.com/bacterias-y-enfermedades.html
www.solociencia.com/.../microbiologia-microorganismos-enfermedades.htm
es.wikipedia.org/wiki/Enfermedad_infecciosa
es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo
www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm
www.scribd.com/.../Medios-de-Cultivo-y-Pruebas-Bioquimicas
www.mailxmail.com/.../analisis-microbiologicos-medios-cultivo-tipos






Conclusión Final.

Aprendimos muchas cosas nuevas, que no hubiéramos aprendido si no nos hubieran dado carrilla para apurarnos a investigar más a fondo, algunos temas.
Conocimos distintas cosas que nos servirán más adelante, como las bacterias porque afectan al cuerpo y en qué lugar, por donde se transmiten, la clasificación de las bacterias, los distintos medios de cultivo y como se clasifican y se realizan , y pues lo que más nos llamo la atención bueno en mi equipo fue las pruebas bioquímicas, mientras más nos metíamos al tema encontrábamos cosas nuevas, nos quedo claro al fin este tema y esperamos no tener ningún error al presentar y realizar los medios de cultivo.
Lo importante es que aprendimos varias cosas y que creo que si teníamos algún error al realizar algunos medios de cultivo o que no sabíamos que bacterias observaríamos al microscopio.
Es importante seguir investigando para tener más conocimiento y sobre todo no quedarnos atrás creo que falta mucha información que aprender y averiguar.
Fue divertido y a la vez cansado, pero creo que realizamos un buen trabajo al exponerlo ya que al principio nos revolvíamos y no quedaba claro algunas cosas, pero gracias a que nos apuraban a seguir investigando y conociendo mas del tema fue que nos quedo claro.
Esperemos que a todos nos vaya bien, al meternos ya en prácticas.